[Синьхуа книжный магазин подлинные книги] [Печать по требованию] Истинная ядерная биологическая биологическая регуляция/стратегия и технологии концепции и технологии (второе издание) Научная пресса
Цена: 3 424руб. (¥162)
Артикул: 601869429132
Вес товара: ~0.7 кг. Указан усредненный вес, который может отличаться от фактического. Не включен в цену, оплачивается при получении.
Описание товараПродавец:郑州新华书店图书专营店
Адрес:Шанхай
Рейтинг:
Всего отзывов:0
Положительных:0
Добавить в корзину
Другие товары этого продавца
¥49.81 053руб.
¥19402руб.
¥13275руб.
¥1623 424руб.
Параметры продукта
| Истинная регуляция ядерной биологической транскрипции——Концепции, стратегии и технологии (2-е издание) | ||
 | Используемая цена | 180.00 |
| Издатель | научная пресса | |
| Издание | 1 | |
| Опубликованная дата | Май 2015 | |
| формат | 16 | |
| автор | Перевод Ван Цзиньке | |
| Украсить | Мягкая обложка | |
| Количество страниц | 0 | |
| Число слов | 1064 | |
| Кодирование ISBN | 9787030346155 | |
Введение
"Руководство по экспериментам по науке о жизни&миддот; Регуляция транскрипции эукариот: концепции, стратегии и методы (2-е издание)» представляет собой китайский перевод книги «Регуляция транскрипции эукариот – концепции, стратегии и методы (2-е издание)», опубликованной издательством Cold Spring Harbor Laboratory Press в США.Книга представляет собой всестороннее введение в концепцию регуляции транскрипции эукариотических генов, а также стратегии и методы, используемые при проведении исследований.Содержание включает вводные знания. регуляции транскрипции в клетках млекопитающих, идентификация и функциональная характеристика двух важных ролей в регуляции транскрипции генов - элементов ДНК и белковых компонентов, а также важных событий в регуляции транскрипции генов, состоящих из сложных взаимодействий между ними и средой хроматина, в которой эти события происходят.
"Руководство по экспериментам по науке о жизни&миддот; Эукариотическая регуляция транскрипции: концепции, стратегии и технологии (2-е издание)» суммирует основные концепции регуляции транскрипции эукариотических генов, основные стратегии проведения исследований регуляции транскрипции и важные технологии для достижения исследовательских целей.Поэтому «Серия руководств для лабораторий биологических наук»&миддот; Регуляция транскрипции эукариот: концепции, стратегии и методы (2-е издание)» — важное пособие для студентов, преподавателей-исследователей и технических специалистов, которые интересуются регуляцией транскрипции генов или занимаются соответствующими исследованиями в области медицины, биохимии, молекулярной биологии, биотехнологии и других областях.
"Руководство по экспериментам по науке о жизни&миддот; Эукариотическая регуляция транскрипции: концепции, стратегии и технологии (2-е издание)» суммирует основные концепции регуляции транскрипции эукариотических генов, основные стратегии проведения исследований регуляции транскрипции и важные технологии для достижения исследовательских целей.Поэтому «Серия руководств для лабораторий биологических наук»&миддот; Регуляция транскрипции эукариот: концепции, стратегии и методы (2-е издание)» — важное пособие для студентов, преподавателей-исследователей и технических специалистов, которые интересуются регуляцией транскрипции генов или занимаются соответствующими исследованиями в области медицины, биохимии, молекулярной биологии, биотехнологии и других областях.
Каталог
Переводчик
Предисловие
Обзор
Втягиваться
1 Введение в регуляцию транскрипции в клетках млекопитающих
Введение и обзор
Краткое изложение полногеномных подходов
Хроматин и универсальный механизм транскрипции
Структура и организация хроматина
модификация хроматина
Красинг изменяет
универсальная транскрипционная машина
Организация регулятивных зон
Сборка и инициация базальных транскрипционных комплексов
модератор
ТФИИД и ТАФ
активация и торможение
Генетическая активация
Модификации и ремоделирование хроматина во время инициации транскрипции
Схема универсального машинного набора
Начальная фаза элонгации полимеразы II
Полимераза II встречает нуклеосомы внутри генов
Замалчивание или подавление транскрипции
Заключение
Рекомендации
2 Первоначальные стратегические вопросы
Введение и обзор
Экспериментальная стратегия
Методы характеристики новых факторов транскрипции
Анализировать регуляцию новых генов
Тема 2.1 Анализ ядерной каскадной транскрипции
Учитывайте временные затраты и ресурсы, необходимые для достижения четких целей.
Определить цели проекта
Оценить осуществимость анализа
Начало комплексного анализа регуляции транскрипции новых генов
технологии
Схема 2.1 Анализ конкатенации ядра
Рекомендации
3 Расположение сайта начала транскрипции
Введение и обзор
Экспериментальная стратегия
Предварительное рассмотрение
Быстрая амплификация концов кДНК (RACE)
Тема 3.1 Программа RACE, зависящая от шляпы
расширение праймера
Тема 3.2 Расширение праймера
Закон о защите РНКаз
Тема 3.3 Защита от РНКазы
Sl-нуклеазный анализ
Тема 3.4 Защита нуклеаз
Тема 3.5 Влияние интронов на интерпретацию результатов позиционирования стартового сайта
технологии
Протокол 3.1 Анализ расширения праймера
Схема 3.2 Анализ защиты от РНКазы
Рекомендации
4 метода функционального анализа для анализа промотора
Введение и обзор
Экспериментальная стратегия
Выбор метода анализа: преимущества и недостатки различных методов анализа
Анализ транзиторной трансфекции
Тема 4.1. Часто используемые методы трансфекции.
Тема 4.2 Анализ репортерного гена люциферазы
Тема 4.3 Анализ CAT-репортерного гена
Тема 4.4 Анализы репортерных генов LacZ, SEAP и GFP
Тема 4.5 Выделение временно трансфицированных клеток
Анализ стабильной трансфекции путем хромосомной интеграции
Тема 4.6 Векторы с возможностью репликации
технологии
Общие методы трансфекции клеток млекопитающих
Протокол 4.1. Трансфекция фибробластов 3Т3 фосфатом кальция
Протокол 4.2. DEAE-декстрановая трансфекция линий лимфоцитов
Протокол 4.3. Электропорационная трансфекция макрофагов RAW264.7.
Дополнительные инструкции к решениям 4.1–4.3.
Протокол 4.4. Анализ люциферазы
Протокол 4.5. Анализ хлорамфениколацетилтрансферазы
Решение 4.6β-Галактозидазный анализ
Рекомендации
5 Выявление и анализ зон дистанционного управления
6. Идентификация цис-действующих элементов ДНК в контрольных регионах.
7. Идентификация ДНК-связывающих белков и их генов.
8 Подтверждение функциональной значимости взаимодействий белок-ДНК
9. Анализ эндогенных контрольных областей in vivo
10 Идентификация и характеристика доменов регуляторов транскрипции
11 Связывание регуляторного транскрипционного фактора ДНК
12 Сборка транскрипции и преинициаторного комплекса in vitro
13 Изучение динамики хроматина in vitro: сборка, ремоделирование и транскрипция хроматина
Приложение: Примечания
индекс
Предисловие
Обзор
Втягиваться
1 Введение в регуляцию транскрипции в клетках млекопитающих
Введение и обзор
Краткое изложение полногеномных подходов
Хроматин и универсальный механизм транскрипции
Структура и организация хроматина
модификация хроматина
Красинг изменяет
универсальная транскрипционная машина
Организация регулятивных зон
Сборка и инициация базальных транскрипционных комплексов
модератор
ТФИИД и ТАФ
активация и торможение
Генетическая активация
Модификации и ремоделирование хроматина во время инициации транскрипции
Схема универсального машинного набора
Начальная фаза элонгации полимеразы II
Полимераза II встречает нуклеосомы внутри генов
Замалчивание или подавление транскрипции
Заключение
Рекомендации
2 Первоначальные стратегические вопросы
Введение и обзор
Экспериментальная стратегия
Методы характеристики новых факторов транскрипции
Анализировать регуляцию новых генов
Тема 2.1 Анализ ядерной каскадной транскрипции
Учитывайте временные затраты и ресурсы, необходимые для достижения четких целей.
Определить цели проекта
Оценить осуществимость анализа
Начало комплексного анализа регуляции транскрипции новых генов
технологии
Схема 2.1 Анализ конкатенации ядра
Рекомендации
3 Расположение сайта начала транскрипции
Введение и обзор
Экспериментальная стратегия
Предварительное рассмотрение
Быстрая амплификация концов кДНК (RACE)
Тема 3.1 Программа RACE, зависящая от шляпы
расширение праймера
Тема 3.2 Расширение праймера
Закон о защите РНКаз
Тема 3.3 Защита от РНКазы
Sl-нуклеазный анализ
Тема 3.4 Защита нуклеаз
Тема 3.5 Влияние интронов на интерпретацию результатов позиционирования стартового сайта
технологии
Протокол 3.1 Анализ расширения праймера
Схема 3.2 Анализ защиты от РНКазы
Рекомендации
4 метода функционального анализа для анализа промотора
Введение и обзор
Экспериментальная стратегия
Выбор метода анализа: преимущества и недостатки различных методов анализа
Анализ транзиторной трансфекции
Тема 4.1. Часто используемые методы трансфекции.
Тема 4.2 Анализ репортерного гена люциферазы
Тема 4.3 Анализ CAT-репортерного гена
Тема 4.4 Анализы репортерных генов LacZ, SEAP и GFP
Тема 4.5 Выделение временно трансфицированных клеток
Анализ стабильной трансфекции путем хромосомной интеграции
Тема 4.6 Векторы с возможностью репликации
технологии
Общие методы трансфекции клеток млекопитающих
Протокол 4.1. Трансфекция фибробластов 3Т3 фосфатом кальция
Протокол 4.2. DEAE-декстрановая трансфекция линий лимфоцитов
Протокол 4.3. Электропорационная трансфекция макрофагов RAW264.7.
Дополнительные инструкции к решениям 4.1–4.3.
Протокол 4.4. Анализ люциферазы
Протокол 4.5. Анализ хлорамфениколацетилтрансферазы
Решение 4.6β-Галактозидазный анализ
Рекомендации
5 Выявление и анализ зон дистанционного управления
6. Идентификация цис-действующих элементов ДНК в контрольных регионах.
7. Идентификация ДНК-связывающих белков и их генов.
8 Подтверждение функциональной значимости взаимодействий белок-ДНК
9. Анализ эндогенных контрольных областей in vivo
10 Идентификация и характеристика доменов регуляторов транскрипции
11 Связывание регуляторного транскрипционного фактора ДНК
12 Сборка транскрипции и преинициаторного комплекса in vitro
13 Изучение динамики хроматина in vitro: сборка, ремоделирование и транскрипция хроматина
Приложение: Примечания
индекс
Пробное онлайн-чтение
Анализируя несколько независимых клонов, полученных с использованием конкретной репортерной плазмиды, можно получить информацию о полученном диапазоне и средней активности. Эта информация ценна при попытке сравнить активность контрольной области в различных клеточных линиях или при попытке сравнить контрольную область дикого типа с мутантной контрольной областью. Изменчивость от клона к клону затрудняет эти сравнения, но это может быть полезно, если известна степень изменчивости.Если целью является мониторинг индуцирующей активности определенной контрольной области в стабильно трансфицированных клетках, не менее важно изолировать и анализировать отдельные клоны клеток, поскольку место интеграции влияет на степень индукции.
Анализ клонов клеток. Хотя анализ нескольких различных клонов ценен, в большинстве случаев нет необходимости строго определять, является ли каждый предполагаемый клон действительно клоном.Если небольшая часть лунок 96-луночного планшета содержит устойчивые сообщества, то каждое сообщество, скорее всего, является клональным.Для некоторых экспериментов может быть важно однозначно установить, что каждая колония является клональной (дальнейшее субклонирование клеток путем предельного разведения и идентификация сайтов интеграции с помощью Саузерн-блот-анализа).Однако, поскольку будут сравниваться несколько клонов клеток и ожидаются значительные различия из-за различий в сайтах интеграции, олигоклонирование определенных образцов обычно не будет иметь большого эффекта.Строгое определение числа копий (путем количественного Саузерн-блоттинга или ПЦР в реальном времени) также может не потребоваться, если только не требуется точно определить, какая часть вариаций, наблюдаемых для отдельных клонов, обусловлена изменениями количества копий, а какая - изменениями в сайте интеграции.В некоторых случаях эта информация полезна, например, для определения того, соответствует ли элемент управления определению LCR.Однако для большинства исследований регуляции генов эта информация имеет ограниченную ценность.
Анализ пулов клеток.Альтернативой выделению нескольких отдельных клонов является сравнение нескольких независимых пулов клеток.Потенциальное преимущество этой стратегии заключается в том, что различия внутри каждого пула, вызванные различиями в сайтах интеграции и количестве копий, можно усреднить, тем самым уменьшая различия между пулами; недостатком является то, что если один или несколько клонов демонстрируют преимущество в росте, обусловленное местом интеграции или уровнем экспрессии репортерного гена или гена устойчивости, относительная численность каждого клона в пуле может со временем резко измениться.Фактически, пулы стабильно трансфицированных клеток могут очень быстро стать олигоклональными или моноклональными.Поэтому нельзя предполагать, что анализ клеточных пулов даст средние результаты, полученные при индивидуальном анализе многих клональных линий.Кроме того, результаты, полученные с пулом клеток в один момент времени, могут отличаться от результатов, полученных после пассажа клеток в течение нескольких недель, поскольку обычным явлением является селективный чрезмерный рост клеток.Поэтому важно отметить, что использование пулов клеток не уменьшает количество образцов, которые необходимо анализировать на одну репортерную плазмиду, по сравнению с количеством анализируемых при выделении отдельных клонов.Хотя использование клеточных пулов теоретически могло бы дать средний репортерный сигнал от большого количества отдельных клонов, возможность избирательного чрезмерного роста одного или нескольких клонов делает необходимым исследование нескольких клеточных пулов.Контроль и интерпретация результатов
В анализах стабильной трансфекции необходимы контроли для подтверждения того, что промотор регулируется правильно.Если ожидается, что промотор будет специфичным для типа клеток, это могут подтвердить эксперименты по стабильной трансфекции с различными клеточными линиями.Как и в случае с экспериментами по временной трансфекции, параллельные эксперименты с использованием репортерных генов, управляемых вирусными промоторами/энхансерами, будут способствовать нормализации результатов, полученных на различных клеточных линиях.
……
Анализ клонов клеток. Хотя анализ нескольких различных клонов ценен, в большинстве случаев нет необходимости строго определять, является ли каждый предполагаемый клон действительно клоном.Если небольшая часть лунок 96-луночного планшета содержит устойчивые сообщества, то каждое сообщество, скорее всего, является клональным.Для некоторых экспериментов может быть важно однозначно установить, что каждая колония является клональной (дальнейшее субклонирование клеток путем предельного разведения и идентификация сайтов интеграции с помощью Саузерн-блот-анализа).Однако, поскольку будут сравниваться несколько клонов клеток и ожидаются значительные различия из-за различий в сайтах интеграции, олигоклонирование определенных образцов обычно не будет иметь большого эффекта.Строгое определение числа копий (путем количественного Саузерн-блоттинга или ПЦР в реальном времени) также может не потребоваться, если только не требуется точно определить, какая часть вариаций, наблюдаемых для отдельных клонов, обусловлена изменениями количества копий, а какая - изменениями в сайте интеграции.В некоторых случаях эта информация полезна, например, для определения того, соответствует ли элемент управления определению LCR.Однако для большинства исследований регуляции генов эта информация имеет ограниченную ценность.
Анализ пулов клеток.Альтернативой выделению нескольких отдельных клонов является сравнение нескольких независимых пулов клеток.Потенциальное преимущество этой стратегии заключается в том, что различия внутри каждого пула, вызванные различиями в сайтах интеграции и количестве копий, можно усреднить, тем самым уменьшая различия между пулами; недостатком является то, что если один или несколько клонов демонстрируют преимущество в росте, обусловленное местом интеграции или уровнем экспрессии репортерного гена или гена устойчивости, относительная численность каждого клона в пуле может со временем резко измениться.Фактически, пулы стабильно трансфицированных клеток могут очень быстро стать олигоклональными или моноклональными.Поэтому нельзя предполагать, что анализ клеточных пулов даст средние результаты, полученные при индивидуальном анализе многих клональных линий.Кроме того, результаты, полученные с пулом клеток в один момент времени, могут отличаться от результатов, полученных после пассажа клеток в течение нескольких недель, поскольку обычным явлением является селективный чрезмерный рост клеток.Поэтому важно отметить, что использование пулов клеток не уменьшает количество образцов, которые необходимо анализировать на одну репортерную плазмиду, по сравнению с количеством анализируемых при выделении отдельных клонов.Хотя использование клеточных пулов теоретически могло бы дать средний репортерный сигнал от большого количества отдельных клонов, возможность избирательного чрезмерного роста одного или нескольких клонов делает необходимым исследование нескольких клеточных пулов.Контроль и интерпретация результатов
В анализах стабильной трансфекции необходимы контроли для подтверждения того, что промотор регулируется правильно.Если ожидается, что промотор будет специфичным для типа клеток, это могут подтвердить эксперименты по стабильной трансфекции с различными клеточными линиями.Как и в случае с экспериментами по временной трансфекции, параллельные эксперименты с использованием репортерных генов, управляемых вирусными промоторами/энхансерами, будут способствовать нормализации результатов, полученных на различных клеточных линиях.
……